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蒬丙酯对细菌抗菌效应分析

时间:2012-07-08作者:来源:中国论文库
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  摘要:目的 探讨蒬丙酯对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌的抗菌作用。方法 采用微量肉汤稀释法和M-H平板转种法检测不同浓度的蒬丙酯处理后几种细菌的生长情况, 肉眼

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  摘要:目的 探讨蒬丙酯对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌的抗菌作用。方法 采用微量肉汤稀释法和M-H平板转种法检测不同浓度的蒬丙酯处理后几种细菌的生长情况, 肉眼判断最低抑菌浓度(MI C) 和最小杀菌浓度(MBC) , 并用酶标仪检测各细菌的吸光度值(OD 值) , 用统计软件SPSS16 .0对结果进行分析。结果 蒬丙酯对铜绿假单胞菌没有抑制作用, 不同浓度的蒬丙酯处理后细菌的O D值与阳性对照比较差异无统计学意义; 蒬丙酯能影响大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌的生长, 其中对大肠埃希菌的MIC为128 ~256μg/ml、MBC 为256 ~512μg/ml; 对肺炎克雷伯菌的MIC为512μg/ml、MBC 为1024μg/ml;金黄色葡萄球菌的MIC为256μg/ml、MBC 为512μg/m; 经统计分析低浓度蒬丙酯处理后的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌O D值与阳性对照孔比较差异无统计学意义, 高浓度的蒬丙酯作用后细菌O D值明显减少, 与阳性对照孔比较差异有统计学意义。结论 蒬丙酯能抑制大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌的生长, 可作为一种潜在抗菌药物用于临床上治疗这些细菌引起的感染。

  关键词:蒬丙酯; 微量肉汤稀释法; 细菌; 多药耐药

  超级 细菌指产 新 德 里 金 属

  β- 内 酰 胺 酶I 型(NDM-1) 细菌的提出, 使细菌耐药成为全球的热门话题, 同时也引起了世界卫生组织和各国政府部门的高度重视[1,2]。研发新的抗菌药物或药物增效剂势在必行。我国中草药资源丰富, 不少药物具有抗菌作用[3]。故本试验用微量肉汤稀释法检测蒬丙酯(Propyl gallate) 对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌生长的影响, 为将蒬丙酯用于临床治疗多药耐药菌感染提供实验室依据。

  1 材料与方法

  1 .1材料 溶液配制(1) 培养基: 水解酪蛋白培养基(M- H) 肉汤, 用去离子水稀释, 高压灭菌备用。

  (2)DMSO( 二甲基亚砜) : 分析纯, 购自天津市福晨化学试剂厂。(3) 药物: 蒬丙酯注射液(60 mg/瓶,购自福建省闽东力捷迅药业有限公司) ,M- H 培养基稀释为10 .24 m g/ml 备用。

  1 .2 仪器 美国恒温空气浴摇床、恒温振荡水浴培养箱、恒温细菌培养箱、美国BIO-R A D680型酶标仪。

  1 .3 菌株 从医院检验科微生物室分离的铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌各5株。采用美国德灵公司生产的N C21鉴定药敏板及配套试剂和VIT E K-32进行菌株鉴定和药敏测定, 皆为多药耐药菌株(MDR) 。以铜绿假单胞菌标准菌株A T CC27853、大肠埃希菌A T CC25922作为质控。

  1 .4 方法

  1 .4 .1菌液制备 将待测细菌接种M-H平板,35oС 过夜培养, 次日挑取单菌落用M-H肉汤培养至吸光度值(OD 值)D570 约为0 .5, 收集细菌, 用生理盐水将各株细菌调整浓度为0 .5麦氏单位( 约1×108CF U/ml) , 并 用M-H肉 汤 稀 释 为1 ×105CF U/ml 备用。

  1 .4 .2 药物稀释 试验时各组中蒬丙酯的终浓度分 别 为:1024、512、256、128、64、32、16、8、4、2μg/ml;

  将10 .24 m g/ml 的高浓度蒬丙酯依次稀释为终浓度的10倍, 各取10μl 加至96 孔微量板相应孔中备用, 每一药物组均做3个重复孔。

  1 .4 .3 细菌培养 各取90μl 已稀释好的菌悬液接种到96孔微量板的相应孔中, 其中96孔微量板的第一列不加药物, 作为相应菌株的阳性对照, 最后一列不加药物和菌液作为空白对照。每孔总量为100μl, 不足者以M-H培养基补入。加样完毕后,将96孔板置恒温水浴振荡培养箱中于35oС、低速振荡50 r/m 培养。

  1 .5 结果检测 >18 h观察, 将肉眼观察无细菌生长的培养孔对应的药物浓度作为该药物对相应菌株的最低抑菌浓度(MI C) ; 并吸取10μl 无明显细菌生长的培养物接种无药物的M-H平板于35oС细菌恒温培养箱中继续培养,>18 h观察以转种到M H平板上无细菌生长的最低药物浓度作为该药物对相应菌株的最小杀菌浓度(MBC) 。将各培养板用酶标仪于450 n m处检测培养孔的吸光度值(OD值) 。

  1 .6 统计方法 运用统计软件 SPSS16 .0 中分析试验结果, 以P <0 .05为差异有统计学意义。

  2 结 果

  培养>18 h肉眼观察各阳性对照孔皆有细菌生长, 各空白对照孔无细菌生长, 即阳性对照和阴性对照皆符合试验要求, 说明该试验结果可信。不同浓度的蒬丙酯处理后的铜绿假单胞菌, 包括铜绿假单胞菌的标准株A T C C27853均有生长, 经t检验分析各浓度组的细菌O D值与阳性对照孔比较差异无统计学意义; 有1株多药耐药的大肠埃希菌及其标准菌株A T CC25922在≥ 128μg/ml 的蒬丙酯处理的培养孔中未生长, 余4株在≥ 256μg/ml 的培养孔中未生长, 即蒬丙酯对大肠埃希菌的MIC为128 ~256μg/ml, 经转种后观察到M BC为256 ~512μg/ml;≥ 512μg/ml 蒬丙酯处理后无肺炎克雷伯菌生长,MI C 为512μg/ml,MBC 为1024μg/ml;≥ 256μg/ml 蒬丙酯处理后无金黄色葡萄球菌生长,MI C 为256μg/ml,MBC 为512μg/ml; 经统计分析低浓度蒬丙酯处理后的细菌O D值与阳性对照孔比较差异无统计学意义, 高浓度的蒬丙酯作用后细菌O D值明显减少, 与阳性对照孔比较差异有统计学意义(P <0 .05) 。该试验结果显示蒬丙酯对铜绿假单胞菌无抑制作用, 但能影响大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌的生长。见表1、2、3、4、5。

  3讨论

  随着抗菌药物的广泛使用, 细菌耐药问题越来越突出, 尤其2010年" 超级细菌" 这一概念的提出,改变了世人以往对细菌耐药漠视的状态, 许多国家或组织均采取一定的措施来控制细菌耐药的发生和传播, 其中研发新的药物是重要措施之一, 但细菌耐药产生的步伐远远快于新药的研发和应用, 泛耐药菌(PDR) , 即对头孢菌素、酶抑制剂复方制剂、碳青霉烯类、四环素类和氟喹诺酮类皆耐药菌株的出现,迫切需要探索新的药物或治疗方法来控制其引起的临床感染。祖国医学治疗疾病已有几千年的历史,其中不少药物具有抗菌活性, 而且极少发生耐药性,故从中草药中发掘抗菌药物或药物增效剂可能为控制细菌( 尤其是耐药菌) 感染提供新的途径。

  蒬丙酯是从中药赤芍中提取到的一味中药单体, 具有抗血小板聚集、扩张血管、抗氧化和清除自由基等作用, 临床上广泛用于急性脑梗塞、冠心病心绞痛、血栓性静脉炎等治疗[4]。我们在既往研究中发现蒬丙酯对多药耐药鲍氏不动杆菌具有抑制作用[5], 故本次拟探讨蒬丙酯对其他几种常见病原菌生长的影响。

  铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌是临床上分离到的常见病原菌, 其中铜绿假单胞菌是临床上分离最常见的非发酵革兰阴性菌[6]。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是产超广谱β-内 酰 胺 酶 (ESBLs) 的 主 要 菌 株[7], 而80 .0 % ~92 .0 %的住院患者可分离到耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)[8]。丁清等[9]通过回顾分析新疆某医院在过去2年中医院感染病原菌的构成比, 发现铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是引起医院感染的常见病原菌。而且这些细菌对临床上常用的抗菌药物具有较高的耐药性,李岩岩等[10]通过调查发现, 山东某三甲医院铜绿假单胞菌对哌拉西林/他唑巴坦和亚胺培南具有较高的耐药性, 耐药率分别高达64 .7 %和58 .8 %。与研究者同一地区的张健等[11]发现这4种菌是南充地区分离到的常见病原菌。故本试验选取这4种细菌的耐药菌株来探讨蒬丙酯的抗菌性。

  本研究显示, 蒬丙酯对铜绿假单胞菌没有抑制作用, 但能影响大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌的生长。说明蒬丙酯可作为一种潜在的新药用于临床上治疗由这3种细菌引起感染。

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